Fig 2. Descripción del gráfico del valor de KD:
- Baseline-No antibody
- Association Reaction (Kon) – esta parte de la reacción se utiliza para calcular la «on-rate» (Kon), una constante utilizada para caracterizar la rapidez con la que el anticuerpo se une a su objetivo. La solución del anticuerpo en una concentración específica fue inyectada en el tiempo cero y funcionó a través del microarray del péptido por 15 minutos.,
- reacción de disociación (Koff) – esta parte de la reacción se utiliza para calcular la «tasa de disociación» (Koff), una constante utilizada para caracterizar la rapidez con la que un anticuerpo se disocia de su objetivo.
slope Flatter = slower off-rate / stronger antibody binding
Steeper downside = faster off-rate/weaker antibody binding
En la línea de puntos, la solución se cambió de nuevo a una solución tampón vacía y se corrió a través del microarray del péptido. - cada anticuerpo fue probado en varias concentraciones diferentes, cada una correspondiente a una curva de color diferente en el gráfico., También, cada punto del péptido fue impreso en duplicado en el microarray dando por resultado curvas separadas.
- La relación de las tasas de apagado y encendido medidas experimentalmente (Koff / Kon) se utiliza para calcular el valor KD.
valor KD – FAQs
- ¿Qué representa el valor KD? Cómo se calcula?
- ¿Cuál es la relación entre KD y afinidad de anticuerpos?
- ¿Cuál es el valor KD típico de un anticuerpo? ¿Qué se espera que sea un buen valor KD?
- ¿Cómo se midieron los valores de KD?,
- ¿Cómo se compara este método con otros métodos para medir KD como Biacore?
¿qué representa el valor KD? Cómo se calcula?
KD es la relación de la tasa de disociación de anticuerpos (koff), la rapidez con la que se disocia de su antígeno, a la tasa de asociación de anticuerpos (kon) del anticuerpo, la rapidez con la que se une a su antígeno. Los valores de KD listados en el sitio web se determinaron midiendo las tasas de kon y koff de una interacción específica anticuerpo/antígeno y luego utilizando una relación de estos valores para calcular el valor de KD.,
¿Cuál es la relación entre KD y afinidad de anticuerpos?
la afinidad es la fuerza de unión de una sola molécula a su ligando. Normalmente se mide y se informa por la constante de disociación de equilibrio (KD), que se utiliza para evaluar y clasificar las fuerzas de orden de las interacciones bimoleculares. La Unión de un anticuerpo a su antígeno es un proceso reversible, y la velocidad de la reacción de unión es proporcional a las concentraciones de los reactivos.
en equilibrio, la tasa de formación compleja es igual a la tasa de disociación en sus componentes + ., La medición de las constantes de velocidad de reacción se puede utilizar para definir una constante de equilibrio o afinidad (1/KD). En resumen, cuanto menor sea el valor de KD, mayor será la afinidad del anticuerpo por su objetivo.
¿Cuál es el valor típico de KD para un anticuerpo? ¿Qué se espera que sea un buen valor KD?
La mayoría de los anticuerpos tienen valores de KD en el rango bajo micromolar (10-6) a nanomolar (10-7 a 10-9). Los anticuerpos de alta afinidad generalmente se consideran En el rango nanomolar bajo (10-9) con anticuerpos de muy alta afinidad en el rango picomolar (10-12)., El valor medio de KD para anticuerpos RabMAb basado en más de 850 mediciones utilizando la medición OI-RD es de aproximadamente 7 x 10-11 M, lo que demuestra que, en promedio, los anticuerpos RabMAb tienen una afinidad muy alta.
¿cómo se midieron los valores de KD?
los valores de KD se midieron utilizando un novedoso sistema de detección sin etiquetas desarrollado por el Dr. James Landry y el Dr. Xiangdong Zhu en la Universidad de California Davis, Departamento de Física., Este es un sistema basado en micro-array combinado con un escáner óptico sin etiquetas basado en la diferencia de reflectividad de incidencia oblicua modulada por polarización (Oi-RD) (referencia).
conozca el método Oi-RD.
¿cómo se compara este método con otros métodos para medir KD como Biacore?
Las mediciones cinéticas de seis pares de anticuerpos y antígenos independientes se realizaron utilizando OI-RD o un instrumento Biacore. En este experimento, el antígeno fue capturado al soporte sólido en duplicado., Los datos de unión se obtuvieron inyectando los anticuerpos RabMAb a cuatro concentraciones. El modelo utilizado para ajustar los datos experimentales fue 1-TO-1 Langmuir utilizando el análisis de ajuste de curva global. El análisis comparativo se resume en el cuadro 2 y el gráfico 2. Los resultados indican una excelente correlación, dentro de un orden de magnitud, entre los métodos de análisis.
