Gélose EMB

utilisation prévue

Hardy Diagnostics les formulations de gélose EMB sont recommandées comme milieux sélectifs et différentiels pour l’isolement de bacilles à gram négatif (y compris les organismes coliformes et les agents pathogènes entériques) à partir d’échantillons cliniques et non cliniques.

Cat. aucun. P09 n’est pas destiné à être utilisé pour le diagnostic de la maladie humaine.

résumé

La gélose EMB (Eosin Methylene Blue) (HHT) a été développée par Holt-Harris et Teague comme alternative au milieu Endo pour l’isolement des bacilles entériques.,(4) le colorant D’éosine et le bleu de méthylène ont été employés pour empêcher la croissance des bactéries gram-positives; les colorants servent également d’indicateurs différentiels pour les produits de fermentation. Le Lactose et le saccharose fournissent une source de glucides. La production d’acide à partir de la fermentation du lactose ou du saccharose entraîne l’absorption du complexe de colorant bleu éosine – méthylène par les cellules bactériennes pour produire une apparence de colonie brune à bleu-noir. La formulation HHT établit une distinction claire entre les colonies de lactose et les microorganismes qui ne fermentent pas le lactose., Cependant, cette formulation ne fait pas de distinction entre l’utilisation des glucides (lactose ou saccharose). Par exemple, Yersinia enterocolitica fermente le saccharose et non le lactose, mais produira les mêmes colonies bleu-noir que les fermenteurs de lactose.(2,3,5,7-9)

en 1918, Levine a simplifié la formulation de Holt-Harris et Teague en omettant le saccharose et en doublant la quantité de lactose. La modification a facilité la différenciation D’Escherichia coli d’Enterobacter aerogenes et a mis en parallèle les réactions de la gélose MacConkey pour une meilleure identification des colonies.,

historiquement, la gélose EMB, la Lévine est devenue la formulation prédominante pour détecter les coliformes fécaux et non fécaux. L’American Public Health Association recommande son utilisation dans l’examen microbiologique de l’eau potable, des eaux usées, des produits laitiers et des aliments.(1,11) L’USP recommande son utilisation dans l’exécution des Tests de limite microbienne, et la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis recommande le milieu pour énumérer Escherichia coli et les bactéries coliformes.,(9,12)

FORMULA

Ingredients per liter of deionized water:*

EMB Agar, Levine:
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	10.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	15.0gm

Final pH 7.,1 +/- 0.2 at 25°C.

EMB Agar (HHT):
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	5.0gm
Sucrose	5.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	13.5gm

Final pH 7.2 +/- 0.,2 à 25°C.

* ajusté et/ou complété selon les besoins pour répondre aux critères de performance.

stockage et durée de conservation

stockage: à la réception, conserver à 2-8°C à l’abri de la lumière directe. Les supports ne doivent pas être utilisés s’il y a des signes de détérioration (rétrécissement, fissuration ou décoloration), de contamination ou si la date de péremption est dépassée. Le produit est sensible à la lumière et à la température; protéger de la lumière, de la chaleur excessive, de l’humidité et du gel.

précautions

Pour Cat. G25, G263, J22, J52, J58, J71, J79.

Pour Chat. aucun. P09.,

procédure

prélèvement D’échantillons: consultez les références énumérées pour obtenir des renseignements sur le prélèvement d’échantillons.(1-3,5,8,9,11,12) Le matériel infectieux doit être soumis directement au laboratoire sans délai et protégé contre la chaleur et le froid excessifs. En cas de retard dans le traitement, l’échantillon doit être inoculé sur un support de transport approprié et réfrigéré jusqu’à l’inoculation.

Méthode d’Utilisation: laisser les plaques à température ambiante. La surface de la gélose doit être sèche avant l’inoculation. Inoculer et stries le spécimen dès que possible après la collecte., Si le spécimen à cultiver est sur un écouvillon, rouler l’écouvillon sur une petite zone de la surface de la gélose et stries pour l’isolement avec une boucle stérile. Incuber les plaques de manière aérobie à 35-37°C pendant 18-24 heures et protéger de la lumière. Examiner les plaques pour la morphologie coloniale. Si négatif après 24 heures, réincuber 24 heures supplémentaires.

reportez-vous au document « Support de Plaque de Contact »sur le site Web du document technique Hardy Diagnostics pour plus d’informations sur la méthode D’utilisation de la gélose EMB, plaque de Contact Levine (Cat. aucun. P09).,

interprétation des résultats

Après l’incubation, examiner les plaques pour déterminer la morphologie coloniale typique.

sur la gélose EMB, la Lévine, des colonies isolées de bactéries fermentant le lactose apparaissent de couleur brune à bleu-noir. Escherichia coli apparaît comme de grandes colonies bleu-noir, souvent avec un éclat métallique vert. Enterobacter spp. présent sous forme de colonies mucoïdes brunes à bleu-noir, sans éclat. Colonies qui ne fermentent pas le lactose, comme Shigella spp. et Salmonella spp., apparaissent transparents et incolores.,

sur la gélose EMB (HHT), des colonies isolées de coliformes fermentant le lactose et/ou le saccharose produiront des colonies bleu – noir avec des centres sombres, souvent avec un éclat métallique vert. D’autres coliformes produisent des colonies mucoïdes et roses. Les souches qui ne fermentent pas le lactose ou le saccharose, telles que Salmonella spp. et Shigella spp., généralement présent sous forme de colonies translucides, ambrées ou incolores. Les souches d’Enterococcus faecalis peuvent se développer sous forme de colonies incolores ponctuelles ou très petites.

consulter les références énumérées pour d’autres procédures d’identification des isolats.,(1,3,5,6,8,9)

LIMITATIONS

certaines souches de Salmonella et de Shigella peuvent ne pas pousser sur la gélose EMB.(8)

certaines bactéries gram-positives, telles que les entérocoques, les staphylocoques et les levures, se développent sur ce milieu et forment généralement des colonies ponctuelles. Des organismes Non pathogènes et non fermenteurs de lactose se développeront également sur ce milieu. Des tests biochimiques supplémentaires doivent être effectués afin de distinguer ces organismes des souches pathogènes.

une inoculation en série peut être nécessaire pour assurer l’isolement adéquat des échantillons de flore mixte.

Certaines souches d’E., coli peut ne pas produire un éclat métallique vert caractéristique; par conséquent, l’éclat métallique vert n’est pas diagnostique pour E. coli.(8)

matériaux requis mais non fournis

fournitures et équipements microbiologiques Standard tels que boucles, écouvillons, bâtonnets d’Application, autres milieux de culture, incinérateurs et incubateurs, etc., ainsi que les réactifs sérologiques et biochimiques, ne sont pas fournis.,0e81722f »>Growth; blue-black centered colonies with green metallic sheen

Salmonella enterica
ATCC® 14028 A 24hr 35°C Aerobic Growth; colorless to amber colonies Enterococcus faecalis
ATCC® 29212** B 24hr 35°C Aerobic Partial to complete inhibition; pinpoint colonies at 24 hours