Valore KD: una misura quantitativa dell’affinità anticorpale

Fig 2. Descrizione del grafico del valore KD:

1. Baseline – No anticorpo
2. Association Reaction (Kon) – Questa parte della reazione viene utilizzata per calcolare il “on-rate” (Kon), una costante utilizzata per caratterizzare quanto velocemente l’anticorpo si lega al suo bersaglio. La soluzione dell’anticorpo ad una concentrazione specifica è stata iniettata al tempo zero ed ha attraversato il microarray del peptide per 15 min.,
3. Reazione di dissociazione (Koff)-Questa parte della reazione viene utilizzata per calcolare il “off-rate” (Koff), una costante utilizzata per caratterizzare la velocità con cui un anticorpo si dissocia dal suo bersaglio.
   Pendenza più piatta = off-rate più lento/legame anticorpale più forte
   Downside più ripido = off-rate più veloce/legame anticorpale più debole
   Alla linea tratteggiata, la soluzione è stata commutata di nuovo alla soluzione tampone vuota e correre attraverso il microarray peptide.
4. Ogni anticorpo è stato testato a diverse concentrazioni diverse, ciascuna corrispondente a una diversa curva di colore sul grafico., Inoltre, ogni punto del peptide è stato stampato in duplice copia sul microarray con conseguente curve separate.
5. Il rapporto tra i tassi di off e on misurati sperimentalmente (Koff / Kon) viene utilizzato per calcolare il valore KD.

Valore KD – FAQ

1. Cosa rappresenta il valore KD? Come viene calcolato?
2. Qual è la relazione tra KD e affinità anticorpale?
3. Qual è il tipico valore di KD per un anticorpo? Cosa ci si aspetterebbe di essere un buon valore KD?
4. Come sono stati misurati i valori KD?,
5. Come si confronta questo metodo con altri metodi per misurare KD come Biacore?

Cosa rappresenta il valore KD? Come viene calcolato?

KD è il rapporto tra il tasso di dissociazione anticorpale (koff), la velocità con cui si dissocia dal suo antigene, il tasso di associazione anticorpale (kon) dell’anticorpo, la velocità con cui si lega al suo antigene. I valori di KD elencati sul sito Web sono stati determinati misurando i tassi di kon e koff di una specifica interazione anticorpo / antigene e quindi utilizzando un rapporto di questi valori per calcolare il valore di KD.,

Qual è la relazione tra KD e affinità anticorpale?

L’affinità è la forza di legame di una singola molecola al suo ligando. Viene tipicamente misurata e riportata dalla costante di dissociazione di equilibrio (KD), che viene utilizzata per valutare e classificare le forze dell’ordine delle interazioni bimolecolari. Il legame di un anticorpo al suo antigene è un processo reversibile e la velocità della reazione di legame è proporzionale alle concentrazioni dei reagenti.

All’equilibrio, la velocità di formazione complessa è uguale alla velocità di dissociazione nei suoi componenti + ., La misura delle costanti di velocità di reazione può essere utilizzata per definire una costante di equilibrio o di affinità (1/KD). In breve, minore è il valore di KD maggiore è l’affinità dell’anticorpo per il suo bersaglio.

Qual è il tipico valore di KD per un anticorpo? Cosa ci si aspetterebbe di essere un buon valore KD?

La maggior parte degli anticorpi ha valori KD nell’intervallo da micromolare basso (10-6) a nanomolare (10-7 a 10-9). Anticorpi ad alta affinità generalmente considerati nell’intervallo nanomolare basso (10-9) con anticorpi ad altissima affinità nell’intervallo picomolare (10-12)., Il valore mediano di KD per gli anticorpi RabMAb basato su oltre 850 misurazioni utilizzando la misurazione OI-RD è di circa 7 x 10-11 M, dimostrando che in media gli anticorpi RabMAb hanno un’affinità molto elevata.

Come sono stati misurati i valori KD?

I valori KD sono stati misurati utilizzando un nuovo sistema di rilevamento senza etichette sviluppato dal Dr. James Landry e dal Dr. Xiangdong Zhu presso l’Università della California Davis, Dipartimento di Fisica., Si tratta di un sistema basato su micro-array combinato con uno scanner ottico privo di etichette basato sulla differenza di riflettività obliqua ad incidenza polarizzata (OI-RD) (riferimento).

Scopri il metodo OI-RD.

Come si confronta questo metodo con altri metodi per misurare KD come Biacore?

Le misurazioni cinetiche per sei coppie anticorpo-antigene indipendenti sono state eseguite utilizzando OI-RD o uno strumento Biacore. In questo esperimento, l’antigene è stato catturato al supporto solido in duplice copia., I dati di legame sono stati generati iniettando gli anticorpi RabMAb a quattro concentrazioni. Il modello utilizzato per adattare i dati sperimentali era 1-a-1 Langmuir utilizzando l’analisi di adattamento della curva globale. L’analisi comparativa è riassunta nella tabella 2 e nella figura 2. I risultati indicano un’eccellente correlazione, all’interno di un ordine di grandezza, tra i metodi di analisi.