Valor de KD: uma medição quantitativa da afinidade dos anticorpos

Fig. 2. Description of KD value graph:

1. Baseline-No anticorpo
2. Association Reaction (Kon) – This part of the reaction is used to calculate the “on-rate” (Kon), a constant used to characterize how quickly the anticorpo binds to its target. A solução de anticorpos a uma concentração específica foi injectada no momento zero e percorreu o microarray peptídico durante 15 minutos.,
3. reacção de dissociação (Koff) – esta parte da reacção é usada para calcular a “taxa” (Koff), uma constante usada para caracterizar a rapidez com que um anticorpo se dissocia do seu alvo.declive mais lento / forte ligação de anticorpos mais íngreme = ligação de anticorpos mais rápida/mais fraca na linha pontilhada, a solução foi mudada de volta para solução tampão vazia e flui através do microarray peptídico.
4. cada anticorpo foi testado em várias concentrações diferentes, cada uma correspondendo a uma curva de cor diferente no gráfico., Além disso, cada ponto peptídico foi impresso em duplicado no microarray, resultando em curvas separadas.
5. A razão entre os valores medidos experimentalmente fora e on (Koff / Kon) é usada para calcular o valor KD.

KD value – FAQs

1. O que representa o valor KD? Como é calculado?qual é a relação entre a KD e a afinidade dos anticorpos?qual é o valor KD típico para um anticorpo? O que se espera que seja um bom valor KD?como foram medidos os valores de KD?,
2. Como É Que este método se compara com outros métodos de medição de KD, como o Biacore?

o que representa o valor KD? Como é calculado?

KD é a razão entre a taxa de dissociação de anticorpos (koff), a rapidez com que se dissocia do seu antigénio, e a taxa de associação de anticorpos (kon) do anticorpo, a rapidez com que se liga ao seu antigénio. Os valores de KD listados no sítio Web foram determinados através da medição das taxas de kon e koff de uma interacção específica de anticorpos/antigénios e, em seguida, utilizando uma razão destes valores para calcular o valor de KD.,

Qual é a relação entre KD e afinidade com anticorpos?afinidade é a força de ligação de uma única molécula ao seu ligante. É tipicamente medido e relatado pela constante de dissociação de equilíbrio (KD), que é usada para avaliar e classificar as forças das interações bimoleculares. A ligação de um anticorpo ao seu antigénio é um processo reversível, e a taxa da reacção de ligação é proporcional às concentrações dos reagentes.

no equilíbrio, a taxa de formação complexa é igual à taxa de dissociação em seus componentes + ., A medição das constantes da taxa de reação pode ser usada para definir uma constante de equilíbrio ou afinidade (1/KD). Em suma, quanto menor for o valor KD, maior será a afinidade do anticorpo para o seu alvo.

Qual é o valor KD típico para um anticorpo? O que se espera que seja um bom valor KD?

a maioria dos anticorpos têm valores KD no intervalo micromolar baixo (10-6) a nanomolar (10-7 a 10-9). Anticorpos de alta afinidade geralmente considerados como estando na gama nanomolar baixa (10-9), com anticorpos de afinidade muito elevada estando na gama picomolar (10-12)., O valor médio de KD para os anticorpos RabMAb com base em mais de 850 medições utilizando a medição OI-RD é de aproximadamente 7 x 10-11 M, demonstrando que, em média, os anticorpos RabMAb têm uma afinidade muito elevada.como foram medidos os valores de KD?os valores de KD foram medidos usando um novo sistema de detecção sem etiquetas desenvolvido pelo Dr. James Landry e pelo Dr. Xiangdong Zhu na Universidade da Califórnia Davis, Departamento de Física., Este é um sistema baseado em micro-array combinado com um scanner óptico sem etiquetas baseado na diferença de refletividade de incidência oblíqua modulada de polarização (OI-RD) (referência).

Aprenda sobre o método OI-RD.

como é que este método se compara com outros métodos de medição de KD, como o Biacore?foram efectuadas medições cinéticas para seis pares independentes de antigénios-anticorpos utilizando um instrumento OI-RD ou um Biacore. Neste experimento, o antígeno foi capturado para o suporte sólido em duplicado., Os dados de ligação foram gerados pela injecção dos anticorpos RabMAb em quatro concentrações. O modelo usado para encaixar os dados experimentais foi de 1 Para 1 Langmuir usando análise de ajuste de curva global. A análise comparativa é resumida nos quadros 2 e 2. Os resultados indicam uma excelente correlação, dentro de uma ordem de magnitude, entre os métodos de análise.

Tabela 2. Medições comparativas de KD obtidas utilizando OI-RD e Biacore.