Fig 2. Descrierea graficului valorii KD:
- Baseline-no anticorp
- reacția de asociere ( Kon)-această parte a reacției este utilizată pentru a calcula „on-rate” (Kon), o constantă utilizată pentru a caracteriza cât de repede anticorpul se leagă de ținta sa. Soluție de anticorpi la o concentrație specifică a fost injectat la momentul zero și a alerga peste microarray peptidă timp de 15 min.,
- Reacție de Disociere (Koff) – Această parte de reacție este folosit pentru a calcula „off-rata” (Koff), o constantă a folosit pentru a caracteriza cât de repede un anticorp disociază la tinta.
pantă mai plat = mai lent off-rate / legare anticorp mai puternic
Steeper dezavantaj = mai rapid off-rate / legare anticorp mai slab
la linia punctată, soluția a fost comutat înapoi la soluția tampon gol și a alerga peste microarray peptida. - fiecare anticorp a fost testat la mai multe concentrații diferite, fiecare corespunzând unei curbe de culoare diferite pe grafic., De asemenea, fiecare punct peptidic a fost imprimat în duplicat pe microarray, rezultând curbe separate.
- raportul dintre ratele măsurate experimental off – și on – (Koff / Kon) este utilizat pentru a calcula valoarea KD.
valoare KD – Întrebări frecvente
- ce reprezintă valoarea KD? Cum se calculează?
- care este relația dintre KD și afinitatea anticorpilor?
- care este valoarea KD tipică pentru un anticorp? Ce s-ar aștepta să fie o valoare bună KD?
- cum au fost măsurate valorile KD?,
- cum se compară această metodă cu alte metode de măsurare a KD, cum ar fi Biacore?
ce reprezintă valoarea KD? Cum se calculează?
KD este raportul dintre anticorpi rata de disociere (koff), cât de repede se disociază de antigen cu anticorpul asociere rata (kon) de anticorpi, cât de repede se leagă sale antigen. Valorile KD listate pe site-ul web au fost determinate prin măsurarea ratelor kon și koff ale unei interacțiuni specifice anticorp/antigen și apoi folosind un raport al acestor valori pentru a calcula valoarea KD.,
care este relația dintre KD și afinitatea anticorpilor?
afinitatea este puterea de legare a unei singure molecule la ligand. De obicei este măsurat și raportat de echilibru constanta de disociere (KD), care este folosit pentru a evalua și pentru rang forte ale bimolecular interacțiuni. Legarea unui anticorp la antigenul său este un proces reversibil, iar rata reacției de legare este proporțională cu concentrațiile reactanților.la echilibru, rata de formare complexă este egală cu rata de disociere în componentele sale+., Măsurarea constantelor vitezei de reacție poate fi utilizată pentru a defini o constantă de echilibru sau de afinitate (1/KD). Pe scurt, cu cât valoarea KD este mai mică, cu atât este mai mare afinitatea anticorpului pentru ținta sa.
care este valoarea KD tipică pentru un anticorp? Ce s-ar aștepta să fie o valoare bună KD?
majoritatea anticorpilor au valori KD în intervalul mic micromolar (10-6) până la nanomolar (10-7 până la 10-9). Anticorpii cu afinitate mare sunt considerați, în general, în intervalul nanomolar scăzut (10-9), anticorpii cu afinitate foarte mare fiind în intervalul picomolar (10-12)., Mediana KD valoare pentru RabMAb anticorpi pe baza de peste 850 de măsurători folosind OI-RD de măsurare este de aproximativ 7 x 10-11 M, demonstrând că, în medie, RabMAb anticorpi au afinitate foarte mare.
cum au fost măsurate valorile KD?
KD valorile au fost măsurate folosind un roman label-free detection system dezvoltat de Dr. James Landry și Dr. Xiangdong Zhu de la Universitatea din California Davis, Departamentul de Fizica., Acesta este un sistem bazat pe micro-matrice combinat cu un scaner optic fără etichete bazat pe diferența de reflexie oblică cu incidență modulată de polarizare (OI-Rd) (referință).
Aflați despre metoda OI-Rd.
cum se compară această metodă cu alte metode de măsurare a KD, cum ar fi Biacore?
măsurătorile cinetice pentru șase perechi independente de anticorpi-antigen au fost efectuate utilizând fie OI-RD, fie un instrument Biacore. În acest experiment, antigenul A fost capturat la suportul solid în dublu exemplar., Datele de legare au fost generate prin injectarea anticorpilor RabMAb la patru concentrații. Modelul utilizat pentru a se potrivi datelor experimentale a fost 1-la-1 Langmuir folosind analiza globală a curbei. Analiza comparativă este rezumată în tabelul 2 și figura 2. Rezultatele indică o corelație excelentă, într-un ordin de mărime, între metodele de analiză.Tabelul 2. Măsurători Comparative KD obținute folosind OI-RD și Biacore.
