Fig 2. Description du graphique de la valeur KD:
- Baseline – No antibody
- Association Reaction (Kon) – cette partie de la réaction est utilisée pour calculer le « on-rate » (Kon), une constante utilisée pour caractériser la rapidité avec laquelle l’anticorps se lie à sa cible. Une solution d’anticorps à une concentration spécifique a été injectée au moment zéro et a traversé la puce peptidique pendant 15 min.,
- réaction de Dissociation (Koff) – cette partie de la réaction est utilisée pour calculer le « off-rate » (Koff), une constante utilisée pour caractériser la rapidité avec laquelle un anticorps se dissocie de sa cible.
pente plus plate = liaison d’anticorps plus lente/plus forte
baisse plus raide = liaison d’anticorps plus rapide/plus faible
au niveau de la ligne pointillée, la solution a été basculée vers une solution tampon vide et a traversé la puce peptidique. - chaque anticorps a été testé à plusieurs concentrations différentes, chacune correspondant à une courbe de couleur différente sur le graphique., En outre, chaque point de peptide a été imprimé en double sur la puce électronique, ce qui a entraîné des courbes séparées.
- Le rapport des débits d’arrêt et de marche mesurés expérimentalement (Koff / Kon) est utilisé pour calculer la valeur KD.
valeur KD – FAQ
- Que représente la valeur KD? Comment est-il calculé?
- Quelle est la relation entre la KD et l’affinité des anticorps?
- Quelle est la valeur KD typique pour un anticorps? À quoi s’attendrait-on pour être une bonne valeur KD?
- Comment les valeurs de KD ont-elles été mesurées?,
- comment cette méthode se compare – t-elle à d’autres méthodes de mesure de KD telles que Biacore?
que représente la valeur KD? Comment est-il calculé?
KD est le rapport du taux de dissociation des anticorps (koff), à quelle vitesse il se dissocie de son antigène, au taux d’association des anticorps (kon) de l’anticorps, à quelle vitesse il se lie à son antigène. Les valeurs de KD énumérées sur le site Web ont été déterminées en mesurant les taux de Kon et de koff d’une interaction anticorps/antigène spécifique, puis en utilisant un rapport de ces valeurs pour calculer la valeur de KD.,
Quelle est la relation entre la KD et l’affinité des anticorps?
L’affinité est la force de liaison d’une seule molécule à son ligand. Il est généralement mesuré et rapporté par la constante de dissociation d’équilibre (KD), qui est utilisée pour évaluer et classer les forces d’ordre des interactions bimoléculaires. La liaison d’un anticorps à son antigène est un processus réversible, et le taux de la réaction de liaison est proportionnelle à la concentration des réactifs.
À l’équilibre, le taux de formation du complexe est égal au taux de dissociation dans ses composants + ., La mesure des constantes de vitesse de réaction peut être utilisée pour définir une constante d’équilibre ou d’affinité (1/KD). En bref, plus la valeur KD est petite, plus l’affinité de l’anticorps pour sa cible est grande.
Quelle est la valeur KD typique pour un anticorps? À quoi s’attendrait-on pour être une bonne valeur KD?
La plupart des anticorps ont des valeurs de KD dans la gamme micromolaire (10-6) à nanomolaire (10-7 à 10-9). Les anticorps à haute affinité sont généralement considérés comme étant dans la gamme nanomolaire basse (10-9), les anticorps à très haute affinité étant dans la gamme picomolaire (10-12)., La valeur médiane de KD pour les anticorps RabMAb basée sur plus de 850 mesures utilisant la mesure OI-RD est d’environ 7 x 10-11 M, démontrant qu’en moyenne les anticorps RabMAb ont une très grande affinité.
comment les valeurs de KD ont-elles été mesurées?
Les valeurs de KD ont été mesurées à l’aide d’un nouveau système de détection sans étiquette mis au point par le Dr James Landry et le Dr Xiangdong Zhu au Département de physique de L’Université de Californie à Davis., Il s’agit d’un système basé sur un micro-réseau combiné à un scanner optique sans étiquette basé sur la différence de réflectivité oblique à incidence modulée par polarisation (Oi-RD) (référence).
En savoir plus sur la méthode OI-RD.
comment cette méthode se compare-t-elle à d’autres méthodes de mesure de KD telles que Biacore?
des mesures cinétiques de six paires anticorps-antigène indépendantes ont été effectuées à L’aide de L’OI-RD ou D’un instrument Biacore. Dans cette expérience, l’antigène a été capturé sur le support solide en double., Les données de liaison ont été générées par injection des anticorps RabMAb à quatre concentrations. Le modèle utilisé pour ajuster les données expérimentales était de 1 à 1 Langmuir à l’aide d’une analyse d’ajustement de courbe globale. L’analyse comparative est résumée dans le tableau 2 et la figure 2. Les résultats indiquent une excellente corrélation, dans un ordre de grandeur, entre les méthodes d’analyse.
