EMB Agar

USO PREVISTO

Hardy Diagnostics Le formulazioni EMB Agar sono raccomandate per l’uso come mezzi selettivi e differenziali per l’isolamento di bacilli gram-negativi (inclusi organismi coliformi e patogeni enterici) da campioni clinici e non clinici.

Cat. No. P09 non è destinato ad essere utilizzato per la diagnosi della malattia umana.

SOMMARIO

EMB (Eosin Methylene Blue) Agar (HHT) è stato sviluppato da Holt-Harris e Teague come alternativa al mezzo di End per l’isolamento dei bacilli enterici.,(4) Il colorante eosina e il blu di metilene sono stati impiegati per inibire la crescita dei batteri gram-positivi; i coloranti servono anche come indicatori differenziali per i prodotti della fermentazione. Lattosio e saccarosio forniscono una fonte di carboidrati. La produzione di acido da lattosio – o saccarosio-fermentazione provoca il complesso colorante blu eosina-metilene essere assunto da cellule batteriche per produrre un marrone a aspetto colonia blu-nero. La formulazione HHT fornisce una chiara distinzione tra colonie di lattosio e microrganismi non fermentanti il lattosio., Tuttavia, questa formulazione non discrimina tra l’utilizzo di carboidrati (lattosio o saccarosio). Ad esempio, Yersinia enterocolitica fermenta il saccarosio e non il lattosio, ma produrrà le stesse colonie blu-nere dei fermentatori di lattosio.(2,3,5,7-9)

Nel 1918, Levine semplificò la formulazione di Holt-Harris e Teague omettendo il saccarosio e raddoppiando la quantità di lattosio. La modifica ha facilitato la differenziazione di Escherichia coli da Enterobacter aerogenes e ha parallelo le reazioni dell’Agar MacConkey per una migliore identificazione delle colonie.,

Storicamente, EMB Agar, Levine è diventato la formulazione predominante per la rilevazione di coliformi fecali e non fecali. L’American Public Health Association raccomanda il suo uso nell’esame microbiologico di acqua potabile, acque reflue, latticini e alimenti.(1,11) L’USP raccomanda il suo uso nell’esecuzione di test limite microbico e la Food and Drug Administration (FDA) degli Stati Uniti raccomanda il mezzo per l’enumerazione di Escherichia coli e batteri coliformi.,(9,12)

FORMULA

Ingredients per liter of deionized water:*

EMB Agar, Levine:
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	10.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	15.0gm

Final pH 7.,1 +/- 0.2 at 25°C.

EMB Agar (HHT):
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	5.0gm
Sucrose	5.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	13.5gm

Final pH 7.2 +/- 0.,2 a 25°C.

* Regolato e / o integrato secondo i criteri di prestazione richiesti.

CONSERVAZIONE E SHELF LIFE

Conservazione: Al ricevimento conservare a 2-8°C lontano dalla luce diretta. I supporti non devono essere utilizzati se ci sono segni di deterioramento (restringimento, screpolature o scolorimento), contaminazione o se la data di scadenza è passata. Prodotto è leggero e sensibile alla temperatura; proteggere dalla luce, calore eccessivo, umidità, e il congelamento.

PRECAUZIONI

Per il gatto. nn. G25, G263, J22, J52, J58, J71, J79.

Per il gatto. No. P09.,

PROCEDURA

Raccolta dei campioni: consultare i riferimenti elencati per informazioni sulla raccolta dei campioni.(1-3,5,8,9,11,12) Il materiale infettivo deve essere inviato direttamente al laboratorio senza indugio e protetto da calore e freddo eccessivi. In caso di ritardo nella lavorazione, il campione deve essere inoculato su un mezzo di trasporto appropriato e refrigerato fino all’inoculazione.

Metodo di utilizzo: lasciare riscaldare le piastre a temperatura ambiente. La superficie dell’agar deve essere asciutta prima di inoculare. Inoculare e striare il campione il più presto possibile dopo la raccolta., Se il campione da coltivare è su un tampone, rotolare il tampone su una piccola area della superficie dell’agar e striscia per l’isolamento con un anello sterile. Incubare le piastre aerobicamente a 35-37°C per 18-24 ore e proteggere dalla luce. Esaminate le lastre per la morfologia coloniale. Se negativo dopo 24 ore, reincubare altre 24 ore.

Per ulteriori informazioni sul metodo di utilizzo di EMB Agar, Levine Contact Plate (Cat. No. P09).,

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI

Dopo l’incubazione, esaminare le piastre per la tipica morfologia coloniale.

Su EMB Agar, Levine, colonie isolate di batteri fermentanti il lattosio appaiono di colore da marrone a blu-nero. L’escherichia coli appare come grandi colonie blu-nere, spesso con una lucentezza metallica verde. Enterobacter spp. presente come marrone al blu-nero, colonie mucoidi senza lucentezza. Colonie non fermentanti lattosio, come Shigella spp. e Salmonella spp., appaiono trasparenti e incolori.,

Su EMB Agar (HHT), colonie isolate di coliformi fermentanti lattosio e / o saccarosio produrranno colonie blu – nere con centri scuri, spesso con una lucentezza metallica verde. Altri coliformi producono colonie mucoidi e rosa. Ceppi fermentanti non lattosio o non saccarosio, come Salmonella spp. e Shigella spp., tipicamente presente come colonie traslucide, color ambra o incolori. I ceppi di Enterococcus faecalis possono crescere come colonie incolori puntiformi o molto piccole.

Consultare i riferimenti elencati per ulteriori procedure di identificazione degli isolati.,(1,3,5,6,8,9)

LIMITAZIONI

Alcuni ceppi di Salmonella e Shigella potrebbero non crescere sull’agar EMB.(8)

Alcuni batteri gram-positivi, come enterococchi, stafilococchi e lievito cresceranno su questo terreno e di solito formano colonie puntiformi. Anche gli organismi non patogeni e non fermentanti il lattosio cresceranno su questo terreno. Ulteriori test biochimici devono essere eseguiti per distinguere questi organismi dai ceppi patogeni.

Può essere necessaria un’inoculazione seriale per garantire un adeguato isolamento dei campioni di flora mista.

Alcuni ceppi di E., coli può non riuscire a produrre una caratteristica lucentezza metallica verde; di conseguenza, la lucentezza metallica verde non è diagnostica per E. coli.(8)

MATERIALI RICHIESTI MA NON FORNITI

Forniture e attrezzature microbiologiche standard come anelli, tamponi, bastoncini applicatori, altri mezzi di coltura, inceneritori e incubatori, ecc., così come i reagenti sierologici e biochimici, non sono forniti.,0e81722f”>Growth; blue-black centered colonies with green metallic sheen

Salmonella enterica
ATCC® 14028 A 24hr 35°C Aerobic Growth; colorless to amber colonies Enterococcus faecalis
ATCC® 29212** B 24hr 35°C Aerobic Partial to complete inhibition; pinpoint colonies at 24 hours