Agar EMB (Română)

utilizare preconizată

Hardy Diagnostics formulările de agar EMB sunt recomandate pentru utilizarea ca medii selective și diferențiate pentru izolarea bacililor gram-negativi (inclusiv a organismelor coliforme și a agenților patogeni enterici) din specimene clinice și nonclinice.

Cat. nu. P09 nu este destinat utilizării pentru diagnosticarea bolii umane.EMB (albastru de metilen eosin) Agar (HHT) a fost dezvoltat de Holt-Harris și Teague ca o alternativă la mediul Endo pentru izolarea bacililor enterici.,(4) colorantul eozin și albastrul de metilen au fost folosite pentru a inhiba creșterea bacteriilor gram-pozitive; coloranții servesc, de asemenea, ca indicatori diferențiali pentru produsele de fermentație. Lactoza și zaharoza furnizează o sursă de carbohidrați. Producția de acid din fermentarea lactozei sau zaharozei are ca rezultat preluarea complexului de colorant albastru de eozină-metilen de către celulele bacteriene pentru a produce un aspect de colonie maro până la albastru-negru. Formularea HHT oferă o distincție clară între coloniile de lactoză și microorganismele care nu fermentează lactoza., Cu toate acestea, această formulare nu face discriminări între utilizarea carbohidraților (lactoză sau zaharoză). De exemplu, Yersinia enterocolitica fermentează zaharoză și nu lactoză, dar va produce aceleași colonii albastru-negru ca lactoza-fermentatoare.(2,3,5,7-9)

În 1918, Levine a simplificat formularea Holt-Harris și Teague prin omiterea zaharozei și dublarea cantității de lactoză. Modificarea a facilitat diferențierea Escherichia coli de Enterobacter aerogenes și a paralel reacțiile agarului MacConkey pentru o mai bună identificare a coloniilor.,din punct de vedere istoric, EMB Agar, Levine a devenit formularea predominantă pentru detectarea coliformelor fecale și non-fecale. Asociația Americană de Sănătate Publică recomandă utilizarea sa în examinarea microbiologică a apei potabile, a apelor reziduale, a produselor lactate și a alimentelor.(1,11) USP recomandă utilizarea sa în efectuarea testelor limită microbiene, iar Administrația SUA pentru alimente și medicamente (FDA) recomandă mediul pentru enumerarea bacteriilor Escherichia coli și coliforme.,(9,12)

FORMULA

Ingredients per liter of deionized water:*

EMB Agar, Levine:
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	10.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	15.0gm

Final pH 7.,1 +/- 0.2 at 25°C.

EMB Agar (HHT):
Pancreatic Digest of Gelatin	10.0gm
Lactose	5.0gm
Sucrose	5.0gm
Dipotassium Phosphate	2.0gm
Eosin Y	0.4gm
Methylene Blue	65.0mg
Agar	13.5gm

Final pH 7.2 +/- 0.,2 la 25°C.

* ajustat și / sau suplimentat după cum este necesar pentru a îndeplini criteriile de performanță.

depozitare și termen de valabilitate

depozitare: la primire a se păstra la 2-8°C, departe de lumina directă. Mediile nu trebuie utilizate dacă există semne de deteriorare (micșorare, fisurare sau decolorare), contaminare sau dacă Data de expirare a trecut. Produsul este sensibil la lumină și temperatură; Protejați-vă de lumină, căldură excesivă, umiditate și îngheț.

precauții

Pentru Cat. nr. G25, G263, J22, J52, J58, J71, J79.

pentru pisică. nu. P09.,

procedura

prelevarea probelor: consultați referințele enumerate pentru informații privind prelevarea probelor.(1-3,5,8,9,11,12) materialul infecțios trebuie depus direct la laborator fără întârziere și protejat de căldură și frig excesiv. Dacă există o întârziere în prelucrare, specimenul trebuie inoculat pe un mediu de transport adecvat și refrigerat până la inoculare.metoda de utilizare: lăsați plăcile să se încălzească la temperatura camerei. Suprafața agarului trebuie să fie uscată înainte de inoculare. Inoculați și trageți specimenul cât mai curând posibil după colectare., Dacă specimenul care urmează să fie cultivat se află pe un tampon, rotiți tamponul pe o suprafață mică a suprafeței de agar și dungă pentru izolare cu o buclă sterilă. Se incubează plăcile aerobic la 35-37°C timp de 18-24 ore și se protejează de lumină. Examinați plăcile pentru morfologia colonială. Dacă este negativ după 24 de ore, reîncubați încă 24 de ore.pentru mai multe informații privind metoda de utilizare pentru agar EMB, placa de contact Levine (Cat. nu. P09).,

interpretarea rezultatelor

după incubare, examinați plăcile pentru morfologia tipică colonială.pe agar EMB, Levine, coloniile izolate de bacterii care fermentează lactoza apar de culoare maro până la albastru-negru. Escherichia coli apare ca colonii mari, albastru-negru, adesea cu un luciu metalic verde. Enterobacter spp. prezent ca maro la albastru-negru, colonii mucoide fără luciu. Colonii care nu fermentează lactoza, cum ar fi Shigella spp. și Salmonella spp., apar transparent și incolor.,pe agar EMB (HHT), coloniile izolate de coliforme care fermentează lactoză și/sau zaharoză vor produce colonii albastru – negru cu centre întunecate, adesea cu un luciu metalic verde. Alte coliforme produc colonii mucoide, roz. Tulpini care fermentează fără lactoză sau fără zaharoză, cum ar fi Salmonella spp. și Shigella spp., de obicei prezente ca translucide, chihlimbar colorate sau colonii incolore. Tulpinile Enterococcus faecalis pot crește ca colonii incolore sau foarte mici.consultați referințele enumerate pentru proceduri suplimentare de identificare a izolatelor.,(1,3,5,6,8,9)

limitări

unele tulpini de Salmonella și Shigella pot să nu crească pe agar EMB.(8)

unele bacterii gram-pozitive, cum ar fi enterococi, stafilococi și drojdie vor crește pe acest mediu și, de obicei, vor forma colonii punctuale. Organismele nepatogene, care nu fermentează lactoza, vor crește, de asemenea, pe acest mediu. Trebuie efectuate teste biochimice suplimentare pentru a distinge aceste organisme de tulpinile patogene.

inocularea serială poate fi necesară pentru a asigura izolarea adecvată a probelor de floră mixtă.unele tulpini de E., coli poate eșua pentru a produce un luciu metalic verde caracteristic; în consecință, luciu metalic verde nu este diagnostic pentru E. coli.(8)

materiale necesare, dar care nu sunt furnizate

consumabile și echipamente microbiologice Standard, cum ar fi bucle, tampoane, bastoane aplicatoare, alte medii de cultură, incineratoare și incubatoare etc., precum și reactivi serologici și biochimici, nu sunt furnizați.,0e81722f”>Growth; blue-black centered colonies with green metallic sheen

Salmonella enterica
ATCC® 14028 A 24hr 35°C Aerobic Growth; colorless to amber colonies Enterococcus faecalis
ATCC® 29212** B 24hr 35°C Aerobic Partial to complete inhibition; pinpoint colonies at 24 hours

1. Asociația Americană De Sănătate Publică. Metode Standard pentru examinarea apei și a apelor uzate, APHA, Washington, D. C.

3. Tille, p.m. și colab. Bailey și Scott Diagnostic Microbiology, C. V. Mosby Company, St. Louis, MO.

6. Koneman, E. W., și colab. Atlas de culori și Manual de Microbiologie diagnostică. J. B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.

7. MacConkey, At 1905. Lactoza-fermentarea bacteriilor în fecale. J. Hyg.; 5:333-379.

9. Versalovic, J. și colab. Manual de Microbiologie Clinică., Societatea americană pentru Microbiologie, Washington, D. C.

10. Asigurarea calității pentru mediile de Cultură microbiologică preparate comercial, M22. Institutul de standarde clinice și de laborator (CLSI – fost NCCLS), Wayne, PA.

11. Compendia oficială a standardelor. USP-NF. Convenția farmacopee a Statelor Unite, Rockville, MD.atcc este o marcă înregistrată a colecției de cultură de tip American.

IFU-10402