uso previsto
Hardy Diagnostics se recomiendan las formulaciones de agar EMB como medios selectivos y diferenciales para el aislamiento de bacilos gramnegativos (incluidos los organismos coliformes y los patógenos entéricos) de muestras clínicas y no clínicas.
Cat. no. P09 no está destinado a ser utilizado para el diagnóstico de enfermedades humanas.
resumen
El agar EMB (eosina azul de metileno) (HHT) fue desarrollado por Holt-Harris y Teague como una alternativa al medio de Endo para el aislamiento de bacilos entéricos.,(4) El colorante de eosina y el azul de metileno se emplearon para inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas; los colorantes también sirven como indicadores diferenciales para los productos de fermentación. La lactosa y la sacarosa proporcionan una fuente de carbohidratos. La producción de ácido a partir de la fermentación de lactosa o sacarosa resulta en que el complejo de colorante azul eosina-metileno sea absorbido por las células bacterianas para producir una apariencia de Colonia de color marrón a azul-negro. La formulación HHT proporciona una clara distinción entre colonias de lactosa y microorganismos no fermentadores de lactosa., Sin embargo, esta formulación no discrimina entre la utilización de carbohidratos (lactosa o sacarosa). Por ejemplo, Yersinia enterocolitica fermenta sacarosa y no lactosa, pero producirá las mismas colonias azul-negras que los fermentadores de lactosa.(2,3,5,7-9)
en 1918, Levine simplificó la formulación de Holt-Harris y Teague omitiendo sacarosa y duplicando la cantidad de lactosa. La modificación facilitó la diferenciación de Escherichia coli de Enterobacter aerogenes, y fue paralela a las reacciones del Agar MacConkey para una mejor identificación de la colonia.,
históricamente, EMB Agar, Levine se ha convertido en la formulación predominante para detectar coliformes fecales y no fecales. La Asociación Americana de Salud Pública recomienda su uso en el examen microbiológico de agua potable, aguas residuales, productos lácteos y alimentos.(1,11) la USP recomienda su uso en la realización de pruebas de límite microbiano, y la administración de alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) recomienda el medio para enumerar Escherichia coli y bacterias coliformes.,(9,12)
FORMULA
Ingredients per liter of deionized water:*
| EMB Agar, Levine: | |
| Pancreatic Digest of Gelatin | 10.0gm |
| Lactose | 10.0gm |
| Dipotassium Phosphate | 2.0gm |
| Eosin Y | 0.4gm |
| Methylene Blue | 65.0mg |
| Agar | 15.0gm |
Final pH 7.,1 +/- 0.2 at 25°C.
| EMB Agar (HHT): | |
| Pancreatic Digest of Gelatin | 10.0gm |
| Lactose | 5.0gm |
| Sucrose | 5.0gm |
| Dipotassium Phosphate | 2.0gm |
| Eosin Y | 0.4gm |
| Methylene Blue | 65.0mg |
| Agar | 13.5gm |
Final pH 7.2 +/- 0.,2 a 25°c.
* ajustado y / o complementado según sea necesario para cumplir los criterios de rendimiento.
almacenamiento y vida útil
almacenamiento: tras la recepción almacenar a 2-8°c lejos de la luz directa. Los medios no deben usarse si hay signos de deterioro (encogimiento, agrietamiento o decoloración), contaminación o si la fecha de vencimiento ha pasado. El producto es sensible a la luz y la temperatura; proteja de la luz, el calor excesivo, la humedad y la congelación.
PRECAUCIONES
Para el Gato. nos. G25, G263, J22, J52, J58, J71, J79.
Para Cat. no. P09.,
procedimiento
recogida de muestras: Consulte las referencias listadas para obtener información sobre la recogida de muestras.(1-3,5,8,9,11,12) El material infeccioso debe enviarse directamente al laboratorio sin demora y protegerse del calor y el frío excesivos. Si se produce un retraso en el procesamiento, la muestra debe inocularse en un medio de transporte adecuado y refrigerarse hasta la inoculación.
método de uso: permita que las placas se calienten a temperatura ambiente. La superficie de agar debe estar seca antes de inocular. Inocular y rayar el espécimen tan pronto como sea posible después de la recolección., Si el espécimen a ser cultivado está en un hisopo, ruede el hisopo sobre un área pequeña de la superficie de agar y raye para el aislamiento con un lazo estéril. Incubar las placas aeróbicamente a 35-37°C durante 18-24 horas y proteger de la luz. Examine las placas para la morfología colonial. Si es negativo después de 24 horas, reincube 24 horas adicionales.
consulte el documento «Contact Plate Media» en el sitio web del documento técnico Hardy Diagnostics para obtener más información sobre el método de uso de embar, Levine Contact Plate (Cat. no. P09).,
interpretación de los resultados
después de la incubación, examine las placas para la morfología colonial típica.
en agar EMB, Levine, colonias aisladas de bacterias fermentadoras de lactosa aparecen de color marrón a azul-negro. Escherichia coli aparece como grandes colonias azul-negras, a menudo con un brillo metálico verde. Enterobacter spp. se presenta como colonias mucoides de color marrón a azul-negro, sin brillo. Colonias que no fermentan lactosa, como Shigella spp. y Salmonella spp., aparecen transparentes e incoloros.,
en agar EMB (HHT), colonias aisladas de coliformes fermentadores de lactosa y/o sacarosa producirán colonias azul – negras con centros oscuros, a menudo con un brillo metálico verde. Otros coliformes producen mucoides, colonias rosadas. Cepas que no fermentan lactosa ni sacarosa, como Salmonella spp. y Shigella spp., típicamente presente como colonias translúcidas, de color ámbar o incoloras. Las cepas de Enterococcus faecalis pueden crecer como colonias incoloras puntiagudas o muy pequeñas.
Consulte las referencias listadas para obtener más procedimientos para la identificación de aislados.,(1,3,5,6,8,9)
limitaciones
algunas cepas de Salmonella y Shigella pueden no crecer en agar EMB.(8)
algunas bacterias grampositivas, como enterococos, estafilococos y levaduras crecerán en este medio y generalmente formarán colonias puntiagudas. Los organismos no patógenos y no fermentadores de lactosa también crecerán en este medio. Deberán realizarse pruebas bioquímicas adicionales para distinguir estos organismos de las cepas patógenas.
la inoculación en serie puede ser necesaria para asegurar el aislamiento adecuado de muestras de flora mixta.
algunas cepas de E., coli puede no producir un brillo metálico verde característico; en consecuencia, el brillo metálico verde no es diagnóstico para E. coli.(8)
materiales requeridos pero no proporcionados
suministros y equipos microbiológicos estándar como bucles, hisopos, barras aplicadoras, otros medios de cultivo, incineradores e incubadoras, etc., así como reactivos serológicos y bioquímicos, no se proporcionan.,0e81722f»>Growth; blue-black centered colonies with green metallic sheen
ATCC® 14028
ATCC® 29212**
** Recommended QC strains for User Quality Control according to the CLSI document M22 when applicable.,
control de calidad del usuario
apariencia física
EMB Agar, Levine debe aparecer claro y púrpura con un tinte verde-naranja en color. Un ligero precipitado también es evidente. EMB Agar (HHT) debe aparecer claro a ligeramente nebuloso, y rojo oscuro a azul-púrpura en color.
colonias de Escherichia coli (ATCC® 25922) que crecen en agar EMB, Levine (Cat. no. G25). Incubadaaerobicamente durante 24 horas a 35°C. tiro en un ángulo para mostrar brillo verde.,
colonias de Escherichia coli (ATCC® 25922) que crecen en agar EMB, Levine (Cat. no. G25). Incubado aeróbicamente durante 24 horas a 35 ° C.
colonias de Salmonella enterica (ATCC® 14028) que crecen en agar EMB, Levine (Cat. no. G25). Incubado aeróbicamente durante 24 horas a 35 ° c.
colonias de Salmonella enterica (ATCC® 14028) que crecen en agar EMB, Levine (Cat. no. G25). Incubado aeróbicamente durante 24 horas a 35°C.,
1. Asociación Americana De Salud Pública. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, APHA, Washington, D. C.
3. Tille, P. M., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C. V. Mosby Company, St. Louis, MO.
6. Koneman, E. W., et al. Atlas de Color y Libro de texto de Microbiología diagnóstica. J. B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.
7. MacConkey, A. T. 1905. Bacterias fermentadoras de lactosa en las heces. J. Hyg.; 5:333-379.
9. Versalovic, J., et al. Manual de Microbiología Clínica., American Society for Microbiology, Washington, D. C.
10. Quality Assurance for Commercially Prepared Microbiological Culture Media, M22. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI-formerly NCCLS), Wayne, PA.
11. The Official Compendia of Standards (en inglés). USP-NF. United States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD.
ATCC es una marca registrada de American Type Culture Collection.
IFU-10402
